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绿弧菌已成对虾万博manbetx官网手机版拦路虎!2022对虾万博manbetx官网手机版如何高效防控?

2022-03-09 10:13:00  万博manbetx官网sports万博manbetx官网手机版网  出处:万博manbetx官网sports万博manbetx官网手机版网        浏览量: 3088 次 我要评论
对虾万博manbetx官网手机版中后期水温升高、投喂量很大,底质水质容易变差,弧菌极易在这种环境里大量繁殖,2021年弧菌病已导致沿海很多虾农损失惨重,部分产区虾农多次排苗、欲哭无泪。2022年,虾农如何防控弧菌?

作者:南京农业大学病理学博士 彭麟

   金南农研究院 朱忠超

一、固体过氧化氢的细菌杀灭试验

1、菌悬液的制备

取各试验菌种的斜面第3代培养物,用无菌生理盐水洗下菌苔,移至另一无菌试管,适当稀释使菌含量为 1 × 107 ~ 5 × 107 CFU·mL-1,制成菌悬液备用。中和剂选择试验: 中和剂组方: 10 g·L-1硫代硫酸钠( A 组) ,10 g·L-1硫代硫酸钠 + 10 g·L -1吐温-80 ( B 组) ,10 g·L-1 硫代硫酸钠 + 10 g·L-1 吐温-80 + 10 g·L-1卵磷脂( C 组) ,20 g·L-1 硫代硫酸钠( D 组),均以 PBS 缓冲液配制。以大肠杆菌为试验菌株,以 10.8 g·L-1过氧化氢消毒溶液为试药,设计 6 组:

1) 消毒剂+菌悬液;

2) 消毒剂+菌悬液)+中和剂;

3) 中和剂+菌悬液;

4) 消毒剂+中和剂)+菌悬液;

5) 菌悬液;

6) 培养基。

1.1试验结果判定标准:第 6 组无菌生长,第 4 组无菌生长或仅有少量菌落生长; 第 1 组有菌落生长,较 第 4 组为多,但较第 2、3、5 组为少; 第 2、3、5 组组间误差率不超过 15% 。如试验结果符合以上标准则表明 所选中和剂及其浓度适宜。试验重复 3 次。

1.2定量杀菌试验:设计 10.8 g·L-1、5.4 g·L-1和2.7 g·L-1 3 种质量浓度的 过氧化氢消毒药液。固体过氧化氢消毒液在使用时用无菌水配制。以无菌生理盐水作为阳性对照。取0.5 mL 菌悬液置于无菌试管内,加入 4.5 mL 试验浓度消毒液,立即混匀。分别作用至预设时间( 30 min、60 min、90 min 和 120 min) 后,各取0.5 mL 混合液加入到含4.5mL 中和剂的试管内,作用 30 min 后取 0.5mL 该液做活菌计数,计算杀菌率。试验重复 3 次。

结果处理:按如下公式计算各试验组的平均杀菌率( P) 

P = ∑( Noi - Nti )/ ∑Noi × 100%

式中:Noi为第 i 次试验消毒前或对照组活菌数; Nti为第 i 次试验消毒 t 时后或试验组活菌数。消毒效果评价标准: 对细菌和真菌的杀灭率不低于99.9% ,可判为消毒合格。

数据分析:采用 SPSS 17.0统计软件,对杀菌结果进行方差分析和 Duncan's 多重比较。

2、结果与分析

2.1固体过氧化氢杀菌效果观察

2.1.1中和剂选择:由表 1 可知,中和剂A组第 1 组无菌落生长,且第 2、3、5组间的菌落数误差率为 25.52% ,根据要求,第2、3、5组间的菌落数误差率须小于15% ,所以 A组不符合要求; B组第1组有少量菌落生长,第 4 组无菌落生长,但第 2、3、5 组间的菌落数误差率达到 22.75% ,不符合要求; C 组第1组和第4组菌落数符合要求,但第2、3、5组间的菌落数误差率为18.75% ,也不符合要求。D组第1、4 组菌落数符合要求,且第 2、3、5 组间的菌落数误差率( 3.78% ) 也符合规范要求。上述结果表明,含20 g·L-1硫代硫酸钠的 PBS 缓冲液作为中和剂,可有效中和10.8 g·L-1 过氧化氢消毒液的残留作用。

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注: 1) A 组: 10 g·L-1硫代硫酸钠; B 组: 10 g·L-1硫代硫酸钠+10 g·L-1吐温-80;C 组: 10 g·L-1硫代硫酸钠+10 g·L-1吐温-80+10 g·L-1卵磷脂; D 组: 20 g·L-1硫代硫酸钠

2.1.2试验分组: 1.消毒剂+菌悬液; 2.(消毒剂 +菌悬液)+中和剂; 3.中和剂+菌悬液; 4.(消毒剂 +中和剂) +菌悬液; 5.菌悬液; 6.培养基

固体过氧化氢的杀菌效果:由表2可知,10.8g·L-1过氧化氢消毒液作用30 min,杀灭大肠杆菌效果可达到 99.99% ,消毒合格; 3 种浓度分别作用 60 min,杀菌效果均可达到 99.9% 以上,但10.8 g·L-1与另两种浓度相比,差异显著( P< 0. 05)  5.4g·L-1浓度组与2.7 g·L-1组相比,差异不显著( P>0.05) 。可根据 需求选择不同的作用浓度和作用时间。10.8g·L-1 过氧化氢 消毒液与金黄色葡萄球菌作用 30 min 的杀菌率达到了99.92% ,5.4g·L-1浓度组相比差异不显著( P>0.05)  10.8g·L-1及5.4 g·L-1 浓度组消毒液作用 90 min 时的效果与作用 60min 和 30 min 相比均存在显著性差异( P<0.05) 。2.7g·L-1消毒液不同作用时间杀菌率差异显著( P<0.05)。因此可根据不同需求选择不同作用浓度和时间。 3种浓度分别与副溶血弧菌作用 120 min,杀菌率均可达到 100% ,差异不显著( P>0.05) 。

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注: 同菌种同列不同小写字母表示差异显著( P<0.05)  同行不同大写字母表示差异显著( P<0.05) 。

通过固体过氧化氢对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和副溶血弧菌的杀菌试验,先进一步验证固体过氧化氢杀菌的有效性,同时为南美白对虾万博manbetx官网手机版致病菌的防控提供更坚实的数据,结合南美白对虾万博manbetx官网手机版一线分析,才能更好的对致病菌进行防控。

二、南美白对虾万博manbetx官网手机版弧菌感染的来源

1、水体本身存在

一般来说, 弧菌是天然水域自然存在的,属于厌氧菌。如果水体溶氧不足,“氧债”增加,就会给弧菌滋生提供了有利条件。

2、苗种自带

如果在亲虾时期,感染上了弧菌,弧菌可通过垂直方式感染至无节幼体中。苗体中自带的弧菌,具有破坏性大、传染性强、危害深远的特点。

三、弧菌的防控周期

1、前期(放苗后--30天)。此阶段苗体较小,以粉料及小粒径饲料为主,而对虾摄食量有限,产生的残饵多,导致水体中有机物会快速增加,弧菌会快速繁殖,尤其是体内弧菌的繁殖,破坏力更大,危害更严重。此阶段弧菌防控应为3-5天一次。

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虾苗期弧菌较多,虾苗可以安全消毒杀菌吗?首先明确告诉大家, 苗期是可以消毒的,但是要选正确、安全、无刺激的消毒产品!

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2、中期(31--60天)。此阶段对虾个头变大,饲料投喂增加,饲料粒径在1.0左右,对虾处于快速生长期,对水体溶氧需求增大。如果溶氧不足,弧菌就会大量繁殖。此阶段弧菌防控应为5-7天一次。

3、后期(61--90天)。此阶段饲料投喂量大,易出现缺氧现象,导致弧菌爆发。此阶段弧菌防控为7-10天一次,推荐使用量为:过氧化氢粉250克/棚+过氧化氢颗粒500克/棚。

四、弧菌为什么爆发快

通过多年的跟踪分析,对于弧菌快速爆发原因,总结如下:

1、苗种自带的弧菌,危害很大,导致苗种死亡率更高;

2、底溶氧不足,弧菌繁殖加快;

3、水体有机物过多,水体耗氧量剧增,导致弧菌快速繁殖;

4、消毒类产品的不合理使用,导致水体微生态失衡,弧菌增加;

5、极端气候的出现,会导致弧菌防控难度增加。

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